fa تهیه و ارزیابی بارگذاری پروتئین ریواکس در نانوذرات کایتوزان نانوبیوتکنولوژی(ریز زیست فناوری) Nanobiotechnology تجربی Experimental <strong><span style="color:blue;"><span style="font-family:2 mitra;">سابقه</span></span></strong> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-family:2 mitra;">و هدف: </span></span></strong><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">سم ریسین یک گلیکوپروتئین هترودایمر می&shy;باشد که با توجه به سمیت بالا از آن بعنوان یک عامل بیوتروریسمی استفاده می&shy;شود. درحال حاضر مطالعات ایمنی&shy;زایی علیه ریسین بر روی دو کاندید واکسن زیر واحدی شامل ریواکس و </span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">RVEc</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> متمرکز شده است. این مطالعات، ایمنی&shy;زایی کاندید واکسن را به صورت تنها و همراه با ادجوانت مورد بررسی قرار داده&shy;اند ولی تاکنون از سیستم&shy;های تحویل نوین مانند نانوذرات، برای بهبود ایمنی</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">&shy;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">زایی آنها استفاده نشده است. هدف از این تحقیق،تهیه و ارزیابی بارگذاری کاندید واکسن نوترکیب ریواکس در نانوذرات کیتوزان می باشد.</span></span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-family:2 mitra;">مواد و روش&shy;ها:</span></span></strong> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">در این مطالعه تجربی، پس از انتقال ژن ریواکس به </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">باکتری، </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">القاء بیان و تخلیص پروتئین</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">ریواکس</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">توسط ستون کروماتوگرافی </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">میل ترکیبی</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">، پروتئین</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">ریواکس در نانوذرات کایتوزان با روش ژلاسیون&shy;یونی بارگذاری شد. سپس خصوصیات نانوذرات شامل اندازه، مورفولوژی</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">،</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> درصد احتباس و الگوی رهایش پروتئین ریواکس از نانوذرات و پایداری این پروتئین در طی شرایط اسیدی بارگذاری در نانوذرات توسط </span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">SDS-PAGE</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> مورد ارزیابی قرار گرفت. </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">همچنین بررسی ایمنی</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">&shy;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">زایی بر روی 3 گروه 4تایی موش توسط پروتئین ریواکس، نانوذرات حاوی پروتئین و بافرفسفات صورت پذیرفت.</span></span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-family:2 mitra;">یافته ها:</span></span></strong> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">نتایج این تحقیق نشان داد که نانوذرات حاوی پروتئین دارای اندازه 178نانومتر</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">،</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> پتانسیل زتای27/8+ میلی&shy;ولت و</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">شاخص پراکندگی برابر 0/193 می&shy;باشند. همچنین </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">برطبق</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> نتایج </span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">SDS-PAGE</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">مشخص شد </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">که </span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">پروتئین ریواکس</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">در طی فرآیند تهیه نانوذرات کایتوزان تخریب می&shy;شود. بالاترین تیتر آنتی&shy;بادی مربوط به گروه دریافت کننده پروتئین به تنهایی بود (0/082&nbsp;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:calibri,sans-serif;">&plusmn;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> 2/606) که با گروه دریافت‌کننده نانوذرات حاوی پروتئین (0/005&nbsp;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:calibri,sans-serif;">&plusmn;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"> 0/367) و گروه شاهد تفاوت معنی&shy; داری داشت (0/01</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">p<</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">). همچنین از لحاظ آماری تفاوت معنی&shy;داری بین نمونه&shy;های شاهد و نانوذرات بارگذاری شده مشاهده نشد.</span></span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-family:2 mitra;">نتیجه گیری: </span></span></strong><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">نتایج این تحقیق نشان داد که پروتئین ریواکس در شرایط اسیدی تولید نانوذرات کایتوزان، ناپایدار بوده و روش ژلاسیون&shy;یونی برای بارگذاری ریواکس</span></span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">در نانوذرات کایتوزان مناسب نمی</span></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">&shy;</span></span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;">باشد.</span></span> <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="color:#000000;"><strong>BACKGROUND AND OBJECTIVE:</strong> Ricin toxin is a heterodimer glycoprotein which, due to its high toxicity, is used as a bioterrorism agent<span dir="RTL">.</span> Immunogenicity studies against ricin are now focused on two subunit vaccine candidates, including RiVax and RVEc. These studies have examined the vaccine candidate immunization as an alone and in combination with adjuvant, however, there is not a published study on the immunogenicity evaluation of the candidate vaccine through the delivery by nanoparticles. The aim of this study was preparation and evaluation of RiVax recombinant vaccine-loading in chitosan nanoparticles.<br> <strong>METHODS:</strong> In this experimental study, After transferring the RiVax gene to the bacterium, inducing the expression and purification of the RiVax protein by affinity chromatography column, the RiVax protein was loaded with </span><a href="https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwib0pLpia3XAhXHJuwKHb61BMAQFggmMAA&url=http%3A%2F%2Fwww.asiapharmaceutics.info%2Findex.php%2Fajp%2Farticle%2FviewFile%2F220%2F89&usg=AOvVaw1PwyE4cqRryuZXD99azJur"><span style="color:#000000;">Ionic Gelation</span></a><span style="color:#000000;"> method in chitosan nanoparticles. Then, the properties of nanoparticles including size, morphology, loading percentage and release pattern of RiVax protein from nanoparticles and stability of this protein during acidic loading conditions in nanoparticles by SDS-PAGE were evaluated. Also, Immunization study were performed on 3 mouse groups (n=4/group) by RiVax protein, Nanoparticles containing protein and phosphate buffer.<br> <strong>FINDING:</strong> The results of this study showed that the nanoparticles containing protein had a size of 178 nm and a Zeta potential of +27.8 MV and a polydispersity index of 0.193. Also, according to SDS-PAGE results, it was found that the RiVax recombinant protein was denatured during the process of preparing the chitosan nanoparticles.<br> <strong>CONCLUSION: </strong>The results of this study showed that the RiVax protein has been unstable in acidic conditions for the production of chitosan nanoparticles and </span><a href="https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwib0pLpia3XAhXHJuwKHb61BMAQFggmMAA&url=http%3A%2F%2Fwww.asiapharmaceutics.info%2Findex.php%2Fajp%2Farticle%2FviewFile%2F220%2F89&usg=AOvVaw1PwyE4cqRryuZXD99azJur"><span style="color:#000000;">Ionic Gelation</span></a><span style="color:#000000;"> method is not suitable for loading this protein in chitosan nanoparticles.</span></span></div> کایتوزان, نانوذرات, ریواکس, واکسن Chitosan, Nanoparticles, RiVax, Vaccine 62 69 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-1914-2&slc_lang=fa&sid=1 D Sadeghi داود صادقی davudsadeghi64@yahoo.com 100319475328460033796 100319475328460033796 No 1. Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran 1- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران F Ebrahimi فیروز ابراهیمی febrhimi@ihu.ac.ir 100319475328460033797 100319475328460033797 Yes 1. Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran 1- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران M Zeinoddini مهدی زین الدینی zeinoddini@modares.ac.ir 100319475328460033798 100319475328460033798 No 2. Institute of Biotechnology and Science, Malek-Ashtar University of Technology, Tehran, I.R.Iran 2- پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Y Tarverdizadeh یوسف تاروردی زاده yosof.tarverdizadeh@gmail.com 100319475328460033799 100319475328460033799 No 1. Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran 1- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران M Bakhshi مصطفی بخشی dawoodsadeghi64@yahoo.com 100319475328460033800 100319475328460033800 No 1. Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran 1- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران MJ Bageripor محمد جواد باقری پور mjbagerii@gmail.com 100319475328460033801 100319475328460033801 No 1. Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran 1- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران SM Agaii سیدمجتبی آقایی mojtabaasefi@yahoo.com 100319475328460033802 100319475328460033802 No 1. Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran 1- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران